HILIC、手性、大孔径、体积排阻、SFC分离技术简介

Anavo
2021-08-14

HILIC 分离


HILIC 是正相 (normal phase, NP)、反相 (reverse phase, RP) 和离子色谱技术的混合。RP 洗脱液与 NP 固定相和离子色谱的荷电分析物结合,构成了 HILIC 的基础。其分离机制一直是文献中广泛探讨的主题。然而,人们普遍认为,在极性固定相与缺水流动相的表面上形成富含水层,产生液/液分配。此外,其分离机制比单独分离更为复杂,偶极-偶极相互作用和静电相互作用也能提升保留能力。极性较大化合物与固定相水层的相互作用较强,因此与极性较小化合物相比,其保留时间更长。在反相 HPLC 中观察到与洗脱顺序相反的顺序。以下是 C18、AQ 和 HILIC 色谱柱固定相在极性化合物分析中的应用指南。我们的 ES Industries Epic HPLC 色谱柱系列产品可以提供广泛的固定相,以增强高极性化合物的替代选择性。Epic HILIC POH 是一种新型 HILIC 色谱固定相。其由多羟基聚合物涂层覆盖并键合到硅胶。该聚合物涂层可以增强固定相在HILIC 操作条件下的行为。这样的成分能够提供远高于常规羟基和二醇型固定相的羟基含量。




手性分离


手性在制药、化学和农业行业中日益发挥至关重要的作用。使化合物具有手性的细微差异可以在生物系统中产生显著不同的药理作用。因此,对用于评价手性化合物对映体纯度的立体选择分离技术和分析测定的需求增加了。HPLC 和 SFC 形式的手性色谱分离已成为必要工具⸺不仅用于异构体纯度的分析测定,而且用于异构体的分离和纯化。作为手性分离领域的领导者,我们为您的分析和制备色谱需求提供广泛的 ES Industries ChromegaChiral 创新手性固定相 (Chiral Stationary Phases, CSP)。



大孔径反相分离


RP-HPLC 是分离多肽和蛋白质的重要工具。然而,在 RPHPLC 中通常使用的小孔硅胶(约 100 Å),由于其尺寸造成较大的肽和蛋白质分离效果不佳。较大分析物无法进入小孔,导致仅与硅胶的极小外表面发生有限相互作用。大孔径硅胶(约 300 Å 及以上)在蛋白质和较大的肽之间提供了更大的相互作用,使其能够进入较大的孔,从而产生更高分辨率和增强的峰形。小孔径硅胶可用于分离小肽(例如蛋白质消化物),因为其尺寸很以使用大孔径硅胶,并且可以获得不同的分辨率和选择性。小,可以进入孔中。然而,也可我们的 ES Industries MacroSep® BIO 和 BIO-Gold 大孔径色谱柱系列产品可以为进行生物分析色谱的分析人员提供分析蛋白质、肽和其他生物分子的卓越工具。


小孔径(约 100 Å)对孔径(约 300 Å)示意图。大多数蛋白质无法通过较小的孔进入,从而对相互作用造成限制。



体积排阻分离


体积排阻色谱 (size exclusion chromatography, SEC) 是一种用于分离蛋白质和聚合物的强大技术。其根据分子大小或流体动力学体积来分离这些分子,最大的分子将被首先洗脱,固定相和分析物之间的相互作用对分离的影响降至极低。更小的分子可以扩散到更小的孔中,导致在色谱柱中的洗脱路径更长。SEC 不仅可有效用于蛋白质和聚合物分离,也在表征领域也可以发挥作用,因为可以有效确定聚合物基团的摩尔质量分布。我们的 ES Industries Chromegapore™ 分子体积排阻 (Molecular Size Exclusion, MSE) 色谱柱系列产品包含三种固定相:硅胶、二醇键合硅胶和 TMS 键合硅胶,可以确保水溶性和有机可溶性分析物均能有效分离。



超临界流体色谱分离


超临界流体色谱 (supercritical fluid chromatography, SFC) 是一种“绿色”色谱技术,流动相的主要成分为 CO2,并且适合制备色谱和快速分析色谱领域,用于分离复杂混合物。流动相以 CO2 为基础,因此能使用高性能制备色谱柱(10 - 50 mm 内径以及 3 - 20 μm 的颗粒物粒径),并能实现快速分离和回收纯化的组分。由于SFC 具有高稳定性及其与正相 LC 的关系,SFC 是反相 HPLC 的极佳互补技术。许多 SFC 分离采用“较老的正相 HPLC 类型”固定相(如未改性的硅胶、二醇基、氨基和氰基)。这些固定相很难适应 SFC,并且对SFC 分离存在多种限制,包括容量低、选择性差和峰形不佳。另一方面,我们的 ES Industries GreenSep™ 固定相系列产品经过专门设计,在设计中密切关注键合覆盖率、密度和所有导致高容量固定相的因素,可提供高性能 SFC 分离,具有出色选择性和峰形。



制备色谱


制备 (prep) 色谱是一种用于分离和纯化多种化学物质(包括药物化合物、天然产物和生物分子)的强大技术。从分析型HPLC 色谱柱放大到制备型分离可能是一个巨大挑战。使用分析柱是开发任何制备型 HPLC 分离的关键步骤。为了开发和优化制备型 HPLC 分离,需要对各种分析柱进行评估。在评估色谱分离和制定扩大到制备型HPLC 分离的计划中,分析柱不可或缺。我们的 ES Industries 产品线包含从分析柱扩展到制备柱的全部产品。

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