GB 5009.285-2022维生素B12扩项,原来还需注意这些(新国标!)……

2022-08-30

维生素B12又叫钴胺素,是一种含有3价钴的多环系化合物,4个还原的吡咯环连在一起变成为1个咕啉大环(与卟啉相似),是唯一含金属元素的维生素。维生素B12为红色结晶粉末,无嗅无味,微溶于水和乙醇,在pH值4.5~5.0弱酸条件下最稳定,强酸(pH<2)或碱性溶液中分解,遇热可有一定程度破坏。


高等动植物不能制造维生素B12,自然界中的维生素B12都是微生物合成的。维生素B12是唯一的一种需要一种肠道分泌物(内源因子)帮助才能被吸收的维生素,参与制造骨髓红细胞,防止恶性贫血,防止大脑神经受到破坏。


微信图片_20220830133500.png


GB 5009.285-2022 食品安全国家标准食品中维生素B12的测定,于2022630日正式发布,20221230日正式实施新标准中新增加的两个方法检测要点、注意事项有哪些呢?



GB 5009.285-2022常见问题Q&A


Q:相比GB 5413.14-2010标准相比,GB 5009.285-2022有哪些变化呢?


解答:

1)检测范围的变化:GB 5413.14-2010只适用于婴幼儿食品、乳及乳制品;GB 5009.285-2022扩大了检测范围,不仅适用于婴幼儿食品、乳及乳制品,而且可以适用于肉、肉制品,以及食谷物、烘焙食品、果冻、饮料等基质。


2)测定方法的变化:GB 5413.14-2010主要采用的是微生物法,GB 5009.285-2022在微生物方法的基础上,增加了第一法液相色谱法和第二法液相色谱-质谱法。由于检测基质的扩展,扩展到了肉、肉制品,以及食谷物、烘焙食品、果冻、饮料等,样品基质更复杂,含量更低。因此,采取了免疫亲和柱对目标化合物进行净化和富集。

图片
图片

Q:GB 5009.285-2022第一法&第二法,为何试样经酶解后,需要使用氰化钾(或氰化钠)溶液?


解答:

维生素 B12家族中有四大成员:氰钴胺、羟钴胺、甲钴胺和腺苷钴胺。自然界中,微生物生物合成的维生素B12最终形式为羟钴胺、甲钴胺和腺苷钴胺;


但是由于它们性质不太稳定,在检测过程中人为地加入氰化钾,使天然形式的维生素B12转化为性质更为稳定的氰钴胺,因此我们检测食品中的维生素B12只需检测氰钴胺。

图片
图片

Q:氰化钾作为剧毒品,在使用时有哪些注意事项呢?


解答:

氰化钾是无机剧毒品,在空气中吸收水分和CO2,逐渐分解并放出有杏仁气味的HCN,赤热时,与CO2反应形成CO和氰酸钾。剧毒!!!


操作人员必须穿好工作服,戴好手套,口罩,护目镜。氰化钾溶液落在皮肤上, 用大量水清洗,然后缠上有硼酸或硼油的湿绷带。地面残留物用五倍大苏打溶液中和清除。


应密闭保存,放在阴凉干燥处,与其他物品隔开,并与酸类和氧化剂隔绝。

图片
图片

Q:GB 5009.285-2022新标准为何要新增免疫亲和前处理方法?


解答:

之前标准采用的是微生物法,其缺点是定量能力差。新方法中免疫亲和柱的使用,可以将样品中的维生素B12进行富集、浓缩,大大提高了检出能力,同时,有效去除样品中的干扰杂质,然后进一步进行液相或液质分析。


免疫亲和法用于维生素B12的前处理,并不是最近创立的新方法。早在2008年,GB/T 5009.217-2008标准《保健食品中维生素B12的测定》,由原卫生部提出并归口,中国疾病预防控制中心营养与食品安全所起草,标准中已使用了免疫亲和法净化和富集维生素B12。


随着新标准的颁布,将有更多的食品基质纳入检测范围,进一步扩展了维生素B12免疫亲和柱的使用。

图片
图片

Q:GB 5009.285-2022使用维生素B12免疫亲和柱,净化过程有哪些注意的事项呢?


解答:

在使用维生素B12免疫亲和柱,为获得稳定的回收率和重现性,净化过程注意事项:


1)过柱的速度不能太快,尽量控制在2 mL/min,保证目标物的有效充分吸附,否则会使检测结果偏低。


2)氮吹时,气流要缓和,不要吹干,尽量吹到0.2 mL以下,样液中甲醇含量低于20%对目标峰的峰形基本没有影响。(如果样液中甲醇含量,对后续检测存在影响,存在溶剂效应问题,比如:峰形前延,可使用溶剂效应消除器解决。)

峰前延、展宽、分叉!隐形杀手——溶剂效应,到底如何有效解决?……


3)当样品中维生素B12超过测定范围时,请适当减小上柱体积,使其在检测范围内,计算出准确含量。

图片
图片

Q:维生素B12免疫亲和柱的存储条件是?


解答:

该亲和柱保存在2-8 °C条件下,绝对不能冷冻,保质期为18个月。建议在室温(18-30°C)下使用


纳鸥科技为您提供VB12测定整体解决方案

Anavo®维生素B12免疫亲和柱


Anavo®维生素B12免疫亲和柱能够特异性的纯化样品中的维生素B12,它采用了柱状琼脂糖凝胶作为固相载体,琼脂糖凝胶与维生素B12抗体偶联形成免疫吸附剂,装柱制成免疫亲和柱。它能够特异性的纯化样品中的维生素B12。维生素B12亲和柱广泛地应用于饮料、牛奶和奶粉,饮料等样品的提取,该方法速度快、操作简单、准确性高,对提高食品的质量和安全性起到十分重要的作用。


GB5009.285-2022国标中对维生素B12免疫亲和柱的要求:容量≥800 ng,柱回收率≥85%。以下是Anavo®维生素B12免疫亲和柱优势:

微信图片_20220830134838.png


Anavo®维生素B12免疫亲和柱


样品的净化

Anavo®维生素B12免疫亲和柱的柱容量(最大吸附维生素B12)为1000 ng,当样品中维生素B12超过测定范围时,请适当减小上柱体积,使其在检测范围内,计算出准确含量。


将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。将上述样品提取液注入(或分次注入)玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约2mL/min(1-2滴/秒)流速缓慢通过免疫亲和柱,直至液面下降到亲和柱管体(未完全流干)。以2-3mL/min(1-2滴/秒)流速用10.0mL水淋洗,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min(1滴/秒),收集全部洗脱液于玻璃试管中, 50 °C下氮气浓缩吹干后,用流动相定容至0.5 mL,供HPLC或LC-MS分析。

微信图片_20220830135135.png

VB12(氰钴胺) 标准品谱图

(100ng/mL,C18 反相色谱柱4.6*250mm)



GB 5009.285-2022国标配套耗材


企业微信截图_20220830135237.png









分享
写下你的评论吧