GB 5009.285-2022维生素B12扩项，原来还需注意这些（新国标！）……
维生素B12又叫钴胺素，是一种含有3价钴的多环系化合物，4个还原的吡咯环连在一起变成为1个咕啉大环（与卟啉相似），是唯一含金属元素的维生素。维生素B12为红色结晶粉末，无嗅无味，微溶于水和乙醇，在pH值4.5～5.0弱酸条件下稳定，强酸（pH<2）或碱性溶液中分解，遇热可有一定程度破坏。
高等动植物不能制造维生素B12，自然界中的维生素B12都是微生物合成的。维生素B12是唯一的一种需要一种肠道分泌物（内源因子）帮助才能被吸收的维生素，参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血，防止大脑神经受到破坏。
GB 5009.285-2022 《食品安全国家标准食品中维生素B12的测定》，于2022年6月30日正式发布，2022年12月30日正式实施。新标准中新增加的两个方法检测要点、注意事项有哪些呢？
GB 5009.285-2022常见问题Q&A
Q：相比GB 5413.14-2010标准相比，GB 5009.285-2022有哪些变化呢？
解答：
1）检测范围的变化：GB 5413.14-2010只适用于婴幼儿食品、乳及乳制品；GB 5009.285-2022扩大了检测范围，不仅适用于婴幼儿食品、乳及乳制品，而且可以适用于肉、肉制品，以及食谷物、烘焙食品、果冻、饮料等基质。
2）测定方法的变化：GB 5413.14-2010主要采用的是微生物法，GB 5009.285-2022在微生物方法的基础上，增加了第一法液相色谱法和第二法液相色谱-质谱法。由于检测基质的扩展，扩展到了肉、肉制品，以及食谷物、烘焙食品、果冻、饮料等，样品基质更复杂，含量更低。因此，采取了免疫亲和柱对目标化合物进行净化和富集。
Q：GB 5009.285-2022第一法&第二法，为何试样经酶解后，需要使用氰化钾（或氰化钠）溶液？
解答：
维生素 B12家族中有四大成员：氰钴胺、羟钴胺、甲钴胺和腺苷钴胺。自然界中，微生物生物合成的维生素B12形式为羟钴胺、甲钴胺和腺苷钴胺；
但是由于它们性质不太稳定，在检测过程中人为地加入氰化钾，使天然形式的维生素B12转化为性质更为稳定的氰钴胺，因此我们检测食品中的维生素B12只需检测氰钴胺。
Q：氰化钾作为剧毒品，在使用时有哪些注意事项呢？
解答：
氰化钾是无机剧毒品，在空气中吸收水分和CO2，逐渐分解并放出有杏仁气味的HCN，赤热时，与CO2反应形成CO和氰酸钾。剧毒！！！
操作人员必须穿好工作服，戴好手套，口罩，护目镜。氰化钾溶液落在皮肤上， 用大量水清洗，然后缠上有硼酸或硼油的湿绷带。地面残留物用五倍大苏打溶液中和清除。
应密闭保存，放在阴凉干燥处，与其他物品隔开，并与酸类和氧化剂隔绝。
Q:GB 5009.285-2022新标准为何要新增免疫亲和前处理方法？
解答：
之前标准采用的是微生物法，其缺点是定量能力差。新方法中免疫亲和柱的使用，可以将样品中的维生素B12进行富集、浓缩，大大提高了检出能力，同时，有效去除样品中的干扰杂质，然后进一步进行液相或液质分析。
免疫亲和法用于维生素B12的前处理，并不是近创立的新方法。早在2008年，GB/T 5009.217-2008标准《保健食品中维生素B12的测定》，由原卫生部提出并归口，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所起草，标准中已使用了免疫亲和法净化和富集维生素B12。
随着新标准的颁布，将有更多的食品基质纳入检测范围，进一步扩展了维生素B12免疫亲和柱的使用。
Q:GB 5009.285-2022使用维生素B12免疫亲和柱，净化过程有哪些注意的事项呢？
解答：
在使用维生素B12免疫亲和柱，为获得稳定的回收率和重现性，净化过程注意事项：
1）过柱的速度不能太快，尽量控制在2 mL/min，保证目标物的有效充分吸附，否则会使检测结果偏低。
2）氮吹时，气流要缓和，不要吹干，尽量吹到0.2 mL以下，样液中甲醇含量低于20%对目标峰的峰形基本没有影响。（如果样液中甲醇含量，对后续检测存在影响，存在溶剂效应问题，比如：峰形前延，可使用溶剂效应消除器解决。）
峰前延、展宽、分叉！隐形杀手——溶剂效应，到底如何有效解决？……
3）当样品中维生素B12超过测定范围时，请适当减小上柱体积，使其在检测范围内，计算出准确含量。
Q：维生素B12免疫亲和柱的存储条件是?
解答：
该亲和柱保存在2-8 °C条件下，绝对不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C）下使用
纳鸥科技为您提供VB12测定整体解决方案
Anavo®维生素B12免疫亲和柱
Anavo®维生素B12免疫亲和柱能够特异性的纯化样品中的维生素B12，它采用了柱状琼脂糖凝胶作为固相载体，琼脂糖凝胶与维生素B12抗体偶联形成免疫吸附剂，装柱制成免疫亲和柱。它能够特异性的纯化样品中的维生素B12。维生素B12亲和柱广泛地应用于饮料、牛奶和奶粉，饮料等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对提高食品的质量和安全性起到十分重要的作用。
GB5009.285-2022国标中对维生素B12免疫亲和柱的要求：容量≥800 ng，柱回收率≥85%。以下是Anavo®维生素B12免疫亲和柱优势：
Anavo®维生素B12免疫亲和柱
样品的净化
Anavo®维生素B12免疫亲和柱的柱容量(吸附维生素B12)为1000 ng，当样品中维生素B12超过测定范围时，请适当减小上柱体积，使其在检测范围内，计算出准确含量。
将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。将上述样品提取液注入（或分次注入）玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2mL/min（1-2滴/秒）流速缓慢通过免疫亲和柱，直至液面下降到亲和柱管体（未完全流干）。以2-3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集全部洗脱液于玻璃试管中， 50 °C下氮气浓缩吹干后，用流动相定容至0.5 mL，供HPLC或LC-MS分析。
VB12（氰钴胺） 标准品谱图
（100ng/mL，C18 反相色谱柱4.6*250mm）
GB 5009.285-2022国标配套耗材