关于儿茶酚胺

儿茶酚胺（Catecholamine, CA ）是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。儿茶酚胺主要包括去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA），其代谢物包括变肾上腺素（MN）、去甲变肾上腺素（NMN）以及3-甲氧酪胺儿（3-MT）。

儿茶酚胺的含量与肾上腺髓质瘤密切相关，这些肾上腺髓质瘤会结合大量儿茶酚胺导致循环失常；儿茶酚胺含量过高会引发高血压和心肌梗塞，含量过低则通常导致低血压；另外儿茶酚胺含量水平的不同与心脏猝死、冠状心脏病和心脏不充血等也有潜在联系。准确检测体内儿茶酚胺的含量，在临床上可以用于辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤等内分泌相关疾病。

儿茶酚胺检测难点和痛点

儿茶酚胺及其代谢物的极性较大、结构相近，而且在血浆中含量较低、干扰较大，传统的免疫法不能准确定量，必须采用先进的样品前处理方法和灵敏度更高、选择性更好的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法进行定量分析。

目前血样中儿茶酚胺的前处理主要的方法是WCX（弱阳离子）净化法，但WCX净化法具有以下缺点：

1、步骤繁琐，WCX固相萃取净化需要进行活化、平衡、上样、淋洗、洗脱等流程。

2、繁琐的前处理步骤，不利于血样样品的自动化前处理操作。同时，复杂的前处理过程，增加了检测结果的不稳定因素。

3、前处理过程耗时、费力，以处理96个样品为例，使用WCX 96孔板净化样品，约需210 min。

创新产品：HMR超效分体96孔板

纳鸥科技（Anavo）聚焦生物样品前处技术，通过技术攻关，创新推出Anavo HMR超效分体96孔板，相比传统儿茶酚胺前处理过程，具有以下优势：

01 更少前处理步骤&时间

Anavo HMR超效分体96孔板，采用新型无机固相萃取材料，可选择性去除复杂基质中脂质，无需经过传统固相萃取柱的活化、淋洗、洗脱等流程，血样可直接上样净化。仅需一步，即可同时在管内完成蛋白沉淀和样品净化。

下面以处理96个样为例，对两个方法进行对比。

注：以上前处理时间是在理想状况下进行实验的估算

从以上对比可以看出，传统WCX 96孔板，需要经过预处理样品，小柱的活化、平衡、上样、淋洗、洗脱等繁琐步骤，才能完成样品净化。同时，需配置不同的溶液，以及反复移取不同溶液等，操作费时费力，耗时约210 min（以96个样品为例）。

而HMR超效分体96孔板，一步净化法，可同时在管内完成蛋白沉淀和样品净化，耗时仅需50 min（以96个样品为例），净化时间比传统方法缩短了4倍多。极大简化前处理步骤，而且大大节省了宝贵的前处理时间。

02 更少上样量

净化小柱采用阶梯式设计+30 μm小粒径填料，同样质量的填料，更高的柱床和理论塔板数，更优净化效果。同时，更少上样量，特别适用于血清等特别珍贵的生物样本的前处理。

传统96孔板需上样200 μL以上，HMR超效分体96孔板仅需50 μL，大大节省了宝贵的样品。

03 更优净化效果

HMR无机固相萃取填料特异性吸附磷脂基团，可消除磷脂带来的基质效应问题。

一种儿茶酚胺及代谢物的LC-MS/MS检测方法

1、样品前处理

(1) 准确吸取50 µL血清至HMR超效分体96孔板（货号：AN25M006）中，加入同位素内标工作溶液，沿萃取柱内壁缓慢加入200 µL乙腈，通风柜内放置5 min，待溶液通过筛板进入填料中。

(2) 将HMR超效分体96孔板转移至正压装置上，逐步施加压力，将小柱中的液体完全缓慢排出，液体收集至96孔板中。加入200 µL乙腈，重复提取操作一次。收集两次流出液，40 ℃氮气吹至近干，加入50 µL甲醇-水（1:1，v/v）复溶，放置于96孔板涡旋混匀仪混匀1 min，直接上机检测。

2、色谱条件

色谱柱：Gemsil PFP（1.7 μm, 2.1×100 mm），货号：AN80A095；

流动相：A：0.1%甲酸的水溶液，B:乙腈，

梯度洗脱；见表一

流速：0.4 mL/min；

柱温：45 ℃；

进样体积：5 μL。

3、质谱条件

电离方式：电喷雾离子源，正离子模式；

检测方式：多反应监测 (MRM)；

离子源温度 (TEM): 600℃; 雾化气 (Gas1): 70 psi;辅助气 (Gas2): 70 psi； 气帘气 (Gurtain Gas): 30psi;电喷雾电压：5500V；

4、方法学参数

向血清样本中加入标准物质，得到1µg/L、5µg/L、10µg/L三种浓度的加标样品。按照上述前处理方法处理样品，上机检测，具体结果见表3.

5、谱图

六种化合物总离子流图

方法配套关键耗材

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Anavo®超效分体96孔固相萃取板