警惕蜂蜜中的抗生素残留：

蜂蜜富含糖类、黄酮类、维生素等多种营养物质，是一款老少皆宜的营养滋补品。蜂蜜养殖中的某些蜜蜂疾病，可以采用抗生素治疗。同时，抗生素的使用会导致蜂蜜中抗生素的残留和聚积。食用有抗生素残留的蜂蜜会对人体健康产生不同程度的影响和危害。

甲硝唑属于硝基咪唑类抗生素，被普遍用于预防和控制蜜蜂孢子虫病，对厌氧细菌十分有效。近年来，一些研究和文献报道，硝基咪唑类抗生素具有遗传毒性、致突变性和致癌性。氯霉素是一种酰氨醇类广谱抗生素，对多种需氧和厌氧微生物具有活性，它的蛋白质抑制特性使其可有效治疗蜂蜜养殖中的多种传染病。

我国现行标准方法：

现行国家标准和公告中已有蜂蜜中氯霉素残留测定的液相色谱-串联质谱法和气相色谱质谱法（GB/T 20744-2006，农业部781号公告-10-2006，GB/T 18932.19-2003，GB/T 18932.20-2003，GB/T 18932.21-2003）以及甲硝唑类化合物检测的液相色谱-串联质谱法（GB/T 20744-2006），但关于同时检测蜂蜜中甲硝唑和氯霉素的标准方法尚未颁布和实施。

鉴于此，纳鸥科技助力蜂蜜中的甲硝唑和氯霉素残留量同时测定的液相色谱-串联质谱法。2024年 04 月 23日，全新发布的团标T/BPMA 20—2024《蜂蜜中氯霉素和甲硝唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法》为蜂蜜中甲硝唑和氯霉素残留量的同时测定提供一种方法补充和技术支持。

纳鸥科技助力蜂蜜中氯霉素、甲硝唑残留量的测定

方法优势：

本方法中选择C18-NH2复合小柱，采用通过式固相萃取的方式进行样品净化。直接将样品上样固相萃取小柱，滤过液直接进行测定或者经过浓缩后上机测定。与传统的固相萃取中需要进行活化、上样、淋洗、洗脱、浓缩等操作相比，操作简单，尤其适用于大批量样品的测定。

1、标准溶液配置

1.1、标准储备液的配制:分别准确称取适量的氯霉素和甲硝唑标准品,用乙腈配置成 100 mg/L的氯霉素标准品储备液和甲硝唑标准储备液。0℃~5℃保存，有效期6个月。

1.2、内标储备液的配制:分别准确称取适量的氯霉素-D5,和甲硝唑-D4的标准品，用乙腈配置成 100 mg/L的氯霉素-D5的内标储备液和甲硝唑-D4的内标储备液。0℃~5℃保存，有效期6个月。

1.3、1.00mg/L混合标准中间液:分别准确吸取 100mg/L的氯霉素标准储备液和100mg/L的甲硝唑标准储备液0.5mL于50mL容量瓶中，用乙腈配制为1.00 mg/L的混合标准中间液。0℃~5℃保存，有效期3周。

1.4、1.00mg/L 混合内标中间液:分别准确吸取 100 mg/ 的氯霉素-D5标准储备液和 100 mg的甲硝唑-D4标准储备液 0.50 mL于50mL容量瓶中，用乙腈配制为1.00mg/L的混合内标中间液。0℃~5℃保存，有效期3周。

1.5、100μg/L混合标准使用液:准确吸取1.00mg/L的混合标准中间液5.0 mL于50mL容量瓶中，用乙腈配制为100μg/L的混合标准使用液。临用现配。

1.6、100μg/L混合内标使用液:准确吸取1.00mg/L的混合内标中间液 5.0mL, 于50mL容量瓶中,用乙腈配制为100μg/L的混合内标使用液。临用现配。

1.7、混合标准系列溶液:分别准确吸取一定量的混合标准使用液和混合内标使用液，用乙腈-水溶液配制氯霉素和甲硝唑浓度均为:0.1μg/L、0.2μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L的混合标准系列溶液，混合内标浓度为2.0μg/L临用现配。

2、提取

准确称取蜂蜜5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，分别加入40μL 100μg/L混合内标使用，加水5mL，混匀，再加入10mL乙腈，涡旋提取2min，30℃超声提取30min，4℃条件下10000r/min离心8min，吸取上清液于另一洁净试管中。

3、净化

准确移取5mL上清液直接上样于C18-NH2（货号：AN60F022，Anavo 兽残检测专用柱）小柱，使样品自然通过，接受全部流出液，将样液再40℃水浴条件下氮吹至近干，用乙腈-水溶液（1：9）定容至1mL，过0.22μm滤膜（货号：AN40D009，Anavo针头式过滤器），上机测定。

4、仪器参考条件

4.1 液相色谱参考条件：

a）色谱柱：Leosil XP C18，100mm × 2.1 mm，粒径1.7 μm（货号：AN80A006）

b）流动相：A：5mmol/L乙酸铵溶液，B：乙腈，梯度程序见表1

c）柱温：40℃

d）流速：0.3mL/min

e）进样量：5μL

表1 流动相梯度程序

4.2甲硝唑测定的质谱参考条件：

a）电离方式：电喷雾电力，正离子模(ESI+)

b）毛细管电压：3KV

c）离子源温度：500℃

d）脱溶剂气流量：1000L/h

e）锥孔反吹气流量：150L/h

f）雾化器压力：700kpa

g）检测方式：多反应监测模式（MRM），离子对、锥孔电压、碰撞电压见表2

4.3氯霉素测定的质谱参考条件：

a）电离方式：电喷雾电力，正离子模(ESI-)

b）毛细管电压：2.8KV

c）离子源温度：500℃

d）脱溶剂气流量：1000L/h

e）锥孔反吹气流量：150L/h

f）雾化器压力：700kpa

g）检测方式：多反应监测模式（MRM），离子对、锥孔电压、碰撞电压

表2 MRM参数

5、空白蜂蜜加标样品中的准确度和精密度（n=6）

6、谱图

标准溶液中甲硝唑和甲硝唑-D4的特征离子质量色谱图 （甲硝唑：5.0μg/L，甲硝唑-D4：2.0μg/L）

标准溶液中氯霉素和氯霉素-D5的特征离子质量色谱图(氯霉素：5.0μg/L，氯霉素-D5：2.0μg/L)

0.6μg/kg加标样品中甲硝唑和甲硝唑-D4的特征离子质量色谱图（甲硝唑-D4：2.0μg/L）

0.6μg/kg加标样品中氯霉素和氯霉素-D5的特征离子质量色谱图（氯霉素-D5：2.0μg/L）

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