在婴幼儿配方食品和乳粉中加入适量的脂酶，酶解后用NaOH皂化，用正己烷萃取，蒸干后用正己烷溶解，用液相色谱柱后衍生法（HPLC-锌粉还原柱）用荧光检测器定量测定维生素K1。

1、试样制备

向处理过的试样溶液中加入 1 g 脂肪酶，于 37 ℃±5 ℃恒温空气浴振荡器中振荡过夜，

使其充分酶解。取出酶解好的试样，加入 2 mL 氢氧化钠溶液（4.1），用 50 mL 乙醇将溶液转入 250 mL 的分液漏斗中，充分混匀（必要时加少量饱和氯化钠溶液。加入 50 mL 正己烷。

充分振摇 2 min，静置分层。

放出下层水相于另一个 250 mL 分液漏斗中，留下有机相。向水相中再次加入 50 mL 正己烷再次萃取。合并有机相。用适量蒸馏水洗有机相两次。将有机相通过无水硫酸钠脱水过滤到一个 500 mL 的烧瓶中，在旋转蒸发器上于 40℃±2 ℃下蒸发至近干。用正己烷转移残留物到一个 10 mL 试管中，置氮吹仪上于 40 ℃±2 ℃下吹干，准确加入 1 mL 正己烷，充分振荡溶解残留物。将试管放入冰箱中在0 ℃以下冷冻 1 h 备用。

2、HPLC 测定方法：

色谱柱：Anavo C18，150×4.6mm, 5μm（PN: AN80A029）

锌还原柱，50×4.6mm（PN: AN80A015）

流动相：甲醇900ml，二氯甲烷100ml，冰醋酸0.3 ml，氯化锌1.5g，无水乙酸钠0.5g，溶解过0.45滤膜。

进样量：10 μL

流速：1.0 mL/min

检测波长：荧光检测器：波长EX=243nm   EM=430nm

3、结论

用Anavo C18，150×4.6mm, 5μm色谱柱和锌粉还原柱分析婴幼儿配方食品中的维生素K1，分离效果良好，峰形对称，重复性好。

注：Anavo采用进口Zn锌原料装填而成，是用于检测维生素K1的专用Zn锌还原柱。第一次使用时，请先用纯CH₃OH低流速冲洗，再进行试验。每次试验完毕，请再使用CH₃OH冲洗，以增加Zn锌还原柱的寿命，避免接触水。

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